Фундаментальная онкология

На кафедре фундаментальной онкологии оказываются лабораторные услуги, направленные на диагностику и лечение рака и некоторых заболеваний, влияющих на иммунную систему. В этом объёме командой специалистов выполняются иммунофенотипирование (проточная цитометрия), цитогенетика и флуоресцентная гибридизация in situ (FISH), типирование тканей, иммунология и методы криоконсервации.

Диагностика и классификация гематологических раковых заболеваний проводятся с помощью методов проточной цитометрии, цитогенетики и FISH. Одновременно лабораторные тесты при грибовидном микозе, СПИДе и других иммунологических заболеваниях, вызывающих изменение уровней иммунных клеток, также проводятся методом проточной цитометрии. В нашем подразделении типирования тканей для генетического анализа лиц, которые могут быть подходящими донорами для пациентов с трансплантацией костного мозга, используются методы PCR-SSP и PCR-SSO. Проводится постепенное замораживание до -196 °C стволовых клеток периферической крови (продуктов афереза), собранных у этих лиц или пациентов, и их хранение в паровой фазе жидкого азота (криоконсервация). Кроме того, определение криофибриногена и криоглобулина также входит в услуги кафедры фундаментальной онкологии.

Пациенты, которые воспользуются диагностическими услугами, или образцы, взятые у этих пациентов, направляются на кафедру врачами поликлиники и отделений. Диагностическими услугами, оказываемыми кафедрой фундаментальной онкологии, в среднем пользуются 3000 пациентов в год.

Лаборатория проточной цитометрии

Метод проточной цитометрии используется при оценке гематологических раковых заболеваний и заболеваний, при которых затронуты количественные, физические и функциональные характеристики клеток иммунной системы. Этим методом анализируются наличие и изменение уровня молекул на поверхности клеток. Проводятся определение диагноза и подтипов лейкоза и лимфомы (иммунофенотипирование), определение субпопуляций лимфоцитов при различных заболеваниях иммунной системы (СПИД, грибовидный микоз и др.) и анализ клеточного цикла и ДНК.

Как проводится тест?
Из образцов периферической крови или костного мозга готовится суспензия мононуклеарных клеток. В зависимости от предполагаемого диагноза пациента определяется панель для исследования. Для острых и хронических лейкозов клетки метятся моноклональными антителами, содержащими маркеры лимфоидных и миелоидных клеток. Затем клетки анализируются методом проточной цитометрии по размеру, зернистости и цветам меченых моноклональных антител.

На что следует обратить внимание при анализе методом проточной цитометрии
Для этого теста в отделениях, где пациенты проходят осмотр, необходимо взять 2-3 мл крови или образец костного мозга в пробирку с ЭДТА (с фиолетовой крышкой). Из других жидкостей организма (выпот, спинномозговая жидкость и т. д.) необходимо взять образец максимально возможного объёма.

Приём образцов осуществляется каждый будний день, кроме пятницы, с 08:00 до 12:00. Пациент должен обратиться на кафедру фундаментальной онкологии с направлением, полученным в отделении, где он проходил осмотр.

Результат исследования можно получить на следующий день с 14:00 через больничную систему в секретариате отделения, где проходил осмотр, или в секретариате кафедры фундаментальной онкологии.

Иммунологическая лаборатория

В иммунологической лаборатории проводится определение криоглобулина и криофибриногена — белков, выпадающих в осадок на холоде. Это лабораторные анализы, помогающие в диагностике васкулита или гломерулонефрита у людей, у которых при воздействии холода возникают нарушения кровообращения в коже, особенно рук и ног.

Как проводится тест?
Определение криоглобулина — это метод выявления моноклональных или поликлональных (иммуноглобулиновых) белков, выпадающих в осадок при охлаждении в образцах сыворотки, полученных из крови. Сразу после взятия образца крови его выдерживают при 37°C в течение 2 часов. Затем центрифугируют и отделяют сыворотку. Её выдерживают при +4°C в течение ночи, и оценивают белки, выпавшие в осадок в сыворотке.

Определение криофибриногена — это метод выявления белков, выпадающих в осадок при охлаждении в образцах плазмы, полученных из крови. Сразу после взятия образца крови его выдерживают при 37°C в течение 2 часов. Затем центрифугируют и отделяют плазму. Её выдерживают при +4°C в течение ночи, и оценивают белки, выпавшие в осадок в сыворотке.

На что следует обратить внимание при анализах на криоглобулин и криофибриноген
Для теста на криоглобулин в отделениях, где пациенты проходят осмотр, берётся 2 мл крови в обычную пробирку без антикоагулянта (с красной крышкой). Для теста на криофибриноген в отделениях, где пациенты проходят осмотр, берётся 2 мл крови в пробирку с ЭДТА (с фиолетовой крышкой). Сразу после взятия образец необходимо транспортировать в термосе с водой, нагретой до 37°C. В противном случае образец не принимается.

Приём образцов осуществляется каждый будний день, кроме пятницы, с 08:00 до 12:00. Пациент должен обратиться на кафедру фундаментальной онкологии с направлением, полученным в отделении, где он проходил осмотр.

Результат исследования можно получить на следующий день с 14:00 через больничную систему в секретариате отделения, где проходил осмотр, или в секретариате кафедры фундаментальной онкологии.

Лаборатория тканевого типирования

Тест тканевого типирования

Тест тканевого типирования проводится для проверки тканевой совместимости пациента (реципиента) и его донора перед пересадкой костного мозга. Этим тестом определяется тип человеческих лейкоцитарных антигенов, называемых HLA. Антигены HLA находятся на поверхности практически всех клеток человека. Они представляют попавшие в организм чужеродные антигены и стимулируют иммунную систему. Существует множество типов антигенов HLA, но у каждого человека имеется определённое число и тип антигенов HLA. Часть из них наследуется от матери, часть от отца (генетическая передача), и это называется «тканевым типом» или «типом HLA». При пересадке ткани от человека с непохожим типом HLA тип HLA донора может восприниматься пациентом как «чужой». В этом случае иммунная система пациента (реципиента) активируется для уничтожения пересаженной ткани, и происходит «отторжение ткани». Тест тканевого типирования проводится для поиска наиболее подходящего донора, совместимого с пациентом по тканям, и для снижения отторжения ткани.

Кому проводится:
В нашей лаборатории тест тканевого типирования проводится перед пересадкой костного мозга от родственников. В первую очередь проверяются братья и сёстры, мать, отец и дети пациента. Если подходящий донор не найден, могут быть обследованы и родственники 3-й и 4-й степени.

Как проводится тест:
Лечащий врач пациента назначает «Тест тканевого типирования» для пациента и его доноров. Лицо, которому назначен тест, идёт в Отдел взятия крови и сдаёт образец крови. С образцами крови необходимо обратиться в Отдел приёма образцов лаборатории тканевого типирования Онкологической больницы. В лаборатории после проверки документов, удостоверяющих личность, образцы крови принимаются. На пациента заводится карта и заполняется Форма приёма пациента. Степени родства и особые обстоятельства регистрируются.

Тест тканевого типирования проводится молекулярно-генетическими методами. Сначала из образца крови выделяется ДНК. С использованием полученной ДНК проводятся тесты коммерческими наборами, включающими методы PCR-SSP и PCR-SSO. Результаты тестов анализируются, и заключение готовится в соответствии с молекулярно-генетической терминологией HLA. В заключении приводятся результаты типирования локусов HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DQ, HLA-DR.

На что следует обратить внимание при анализе типирования HLA
Для теста тканевого типирования используется образец крови, взятый из руки обратившегося лица. Образец крови необходимо взять в две пробирки с ЭДТА (с фиолетовой крышкой).

Если за последние 15 дней проводилось переливание крови или имеется беременность, об этом обязательно необходимо сообщить сотруднику лаборатории. Образец отклоняется, если сведения на этикетке записаны неверно или стёрты, образцы свернулись, в пробирке с образцом есть протечка, трещина или она разбита, образцы взяты не в ту пробирку, отсутствуют сведения о пациенте или доноре (диагноз пациента, фамилия и имя назначившего врача, адрес и т. д.).

Результаты теста тканевого типирования оформляются в виде заключения и выдаются в течение 20 дней. Заключения направляются лечащему врачу пациента в закрытом конверте и не выдаются пациенту или его родственникам.

Поскольку заключения содержат генетические сведения о человеке, они не загружаются в информационную систему управления больницы. Они хранятся на компьютере лаборатории под паролем, доступа к ним нет ни у кого, кроме уполномоченных сотрудников лаборатории.

Лаборатория цитогенетики и FISH

Конвенциональная цитогенетика и тест FISH

Методами конвенциональной цитогенетики и флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) исследуются структурно и численно хромосомы — структуры, в которых упакована и хранится генетическая информация каждой клетки (кариотипирование). С помощью кариотипирования выявляются хромосомные нарушения, имеющие решающее значение для диагностики и наблюдения заболеваний, в первую очередь гематологических раковых заболеваний.

Как проводится тест:
Образцы костного мозга в стерильных условиях в течение 24 часов размножаются в культуральной среде, обеспечивающей одновременное деление клеток (синхронизированная культура). Затем собранные клетки наносятся на предметное стекло, и обеспечивается созревание исследуемых хромосом в подходящей среде. Расправившиеся и распределившиеся хромосомы окрашиваются (метод G-бэндинга Гимза-трипсин) и подготавливаются к микроскопическому исследованию. Подготовленные таким образом образцы исследуются в системе анализа изображений структурно и численно, и проводится кариотипирование.

В методе FISH, как и в цитогенетическом тесте, проводится синхронизированная культура с образцами костного мозга. После этого клетки собираются, и на них наносятся флуоресцентно меченые фрагменты ДНК (зонды), распознающие исследуемый участок ДНК. Ожидают связывания зондов с ДНК, а несвязавшиеся фрагменты удаляются промыванием. Ядра клеток также окрашиваются отдельно (краситель DAPI) и исследуются в системе анализа изображений. Результаты цитогенетики и FISH оформляются в соответствии с действующей «Международной системой цитогенетической номенклатуры человека».

На что следует обратить внимание при цитогенетическом анализе и анализе FISH
Цитогенетический тест и тест FISH проводятся на образцах костного мозга. Образцы, взятые в стерильных условиях в шприц с гепарином или в пробирку с гепарином (с зелёной крышкой), необходимо как можно скорее после взятия доставить в лабораторию кафедры фундаментальной онкологии, чтобы свести к минимуму потерю живых клеток. Кроме того, для успеха теста важно, чтобы взятые образцы костного мозга не содержали сгустков. Поэтому рекомендуется после взятия образца один-два раза перевернуть шприц вверх-вниз, чтобы образец хорошо смешался с гепарином. В противном случае образец не принимается.

Заключения по конвенциональной цитогенетике можно получить в течение 2-3 недель, а заключения по FISH в течение 10 дней через больничную систему в секретариате отделения, где проходил осмотр, или в секретариате кафедры фундаментальной онкологии.

Пациенты пользуются рутинными диагностическими услугами, оказываемыми кафедрой фундаментальной онкологии, по запросу и направлению тех отделений, где они проходят осмотр. Образцы крови необходимо доставить в секретариат кафедры (для анализов типирования тканей — в секретариат Лаборатории типирования тканей и Подразделения афереза) с соответствующим талоном направления.

Секретариат кафедры, кабинеты преподавателей и лаборатории фундаментальной онкологии (лаборатория проточной цитометрии, лаборатория иммунологии, лаборатория цитогенетики и FISH) находятся на 1-м этаже Онкологической больницы Университета Хаджеттепе. Лаборатория типирования тканей, лаборатория криобиологии и подразделение цитогенетического анализа находятся на цокольном этаже Онкологической больницы в составе Подразделения афереза.

Телефон:

+90 (312) 305 43 22, +90 (312) 305 43 23 (секретариат кафедры)

+90 (312) 305 44 18, +90 (312) 305 43 25 (лаборатория рутинной диагностики)

+90 (312) 305 44 11 (лаборатория проточной цитометрии)

+90 (312) 305 23 70, +90 (312) 305 23 72, +90 (312) 305 23 73 (лаборатория типирования тканей)

+90 (312) 305 44 12 (подразделение цитогенетического и FISH-анализа)

+90 (312) 305 44 08 (Институт рака, кафедра фундаментальной онкологии)