Grundlagenonkologie

In der Abteilung für Grundlagenonkologie werden Laborleistungen zur Diagnose und Behandlung von Krebs und einigen Erkrankungen, die das Immunsystem betreffen, angeboten. In diesem Rahmen werden Immunphänotypisierung (Durchflusszytometrie), Zytogenetik und Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH), Gewebetypisierung, Immunologie und Kryokonservierung von einem Fachteam durchgeführt.

Diagnose und Klassifikation hämatologischer Krebserkrankungen erfolgen mit Durchflusszytometrie, Zytogenetik und FISH. Zugleich werden auch die Labortests bei Mycosis fungoides, AIDS und anderen immunologischen Erkrankungen, die Veränderungen der Immunzellspiegel verursachen, mit der Durchflusszytometrie durchgeführt. In unserer Gewebetypisierungseinheit werden für die genetische Analyse von Personen, die als geeignete Spender für Knochenmarktransplantationspatienten in Frage kommen, die Verfahren PCR-SSP und PCR-SSO verwendet. Die von diesen Personen oder Patienten gewonnenen peripheren Blutstammzellen (Apheresepräparate) werden schrittweise auf -196 °C eingefroren und in der Dampfphase von flüssigem Stickstoff gelagert (Kryokonservierung). Zu den Leistungen der Abteilung für Grundlagenonkologie gehören außerdem die Bestimmung von Kryofibrinogen und Kryoglobulin.

Patienten, die die diagnostischen Leistungen in Anspruch nehmen, oder die von diesen Patienten entnommenen Proben werden von den Poliklinik- und Stationsärzten an die Abteilung überwiesen. Von den diagnostischen Leistungen der Abteilung für Grundlagenonkologie profitieren jährlich durchschnittlich 3000 Patienten.

Durchflusszytometrie-Labor

Bei hämatologischen Krebserkrankungen und bei der Beurteilung von Erkrankungen, bei denen Zahl, physikalische und funktionelle Eigenschaften von Immunzellen betroffen sind, wird die Methode der Durchflusszytometrie genutzt. Bei dieser Methode werden das Vorhandensein und die Veränderung der Konzentration von Molekülen auf der Zelloberfläche analysiert. Es werden die Diagnose und Subtypbestimmung von Leukämien und Lymphomen (Immunphänotypisierung), die Bestimmung von Lymphozyten-Untergruppen bei verschiedenen Erkrankungen des Immunsystems (AIDS, Mycosis fungoides usw.) sowie Zellzyklus- und DNA-Analysen durchgeführt.

Wie wird der Test durchgeführt?
Aus peripheren Blut- oder Knochenmarkproben wird eine Suspension mononukleärer Zellen hergestellt. Je nach vermuteter Diagnose der Patientin bzw. des Patienten wird das zu untersuchende Panel festgelegt. Bei akuten und chronischen Leukämien werden die Zellen mit monoklonalen Antikörpern markiert, die lymphoide und myeloische Zellmarker enthalten. Anschließend werden die Zellen per Durchflusszytometrie nach Größe, Granularität und den Farben der markierten monoklonalen Antikörper analysiert.

Wichtige Hinweise zur Durchflusszytometrie-Analyse
Für diesen Test muss bei den Patientinnen und Patienten in der Abteilung, in der sie untersucht werden, eine Blut- oder Knochenmarkprobe von 2 bis 3 ml in ein EDTA-Röhrchen (mit violettem Deckel) entnommen werden. Von anderen Körperflüssigkeiten (Erguss, Liquor usw.) sollte eine möglichst große Probenmenge entnommen werden.

Die Probenannahme erfolgt wochentags außer freitags täglich zwischen 08:00 und 12:00 Uhr. Die Patientin bzw. der Patient muss sich mit dem Überweisungsschein der Abteilung, in der die Untersuchung stattfand, an die Abteilung für Grundlagen der Onkologie (Temel Onkoloji Anabilim Dalı) wenden.

Das Untersuchungsergebnis kann ab 14:00 Uhr des Folgetages über das Krankenhaussystem vom Sekretariat der Abteilung, in der die Untersuchung stattfand, oder vom Sekretariat der Abteilung für Grundlagen der Onkologie abgeholt werden.

Immunologielabor

Die Bestimmung von Kryoglobulin und Kryofibrinogen, Proteinen, die in der Kälte ausfallen, erfolgt im Immunologielabor. Dies sind Laboranalysen, die bei Personen mit Durchblutungsstörungen der Haut, insbesondere an Armen und Beinen, bei Kälteeinwirkung zur Diagnose von Vaskulitis oder Glomerulonephritis beitragen.

Wie wird der Test durchgeführt?
Die Kryoglobulinbestimmung ist eine Methode zur Feststellung monoklonaler oder polyklonaler (Immunglobulin-)Proteine, die in aus Blut gewonnenen Serumproben bei Abkühlung ausfallen. Unmittelbar nach der Blutentnahme wird die Probe 2 Stunden bei 37 °C gehalten. Anschließend wird sie zentrifugiert und das Serum abgetrennt. Es wird über Nacht bei +4 °C aufbewahrt, und die im Serum ausgefallenen Proteine werden beurteilt.

Die Kryofibrinogenbestimmung ist eine Methode zur Feststellung von Proteinen, die in aus Blut gewonnenen Plasmaproben bei Abkühlung ausfallen. Unmittelbar nach der Blutentnahme wird die Probe 2 Stunden bei 37 °C gehalten. Anschließend wird sie zentrifugiert und das Plasma abgetrennt. Es wird über Nacht bei +4 °C aufbewahrt, und die im Serum ausgefallenen Proteine werden beurteilt.

Wichtige Hinweise zu den Kryoglobulin- und Kryofibrinogenanalysen
Für den Kryoglobulintest wird den Patientinnen und Patienten in der Abteilung, in der sie untersucht werden, eine Blutprobe von 2 ml in ein glattes Röhrchen ohne Gerinnungshemmer (mit rotem Deckel) entnommen. Für den Kryofibrinogentest wird in der Abteilung, in der sie untersucht werden, eine Blutprobe von 2 ml in ein EDTA-Röhrchen (mit violettem Deckel) entnommen. Unmittelbar nach der Entnahme muss die Probe in einer Thermosflasche mit auf 37 °C erwärmtem Wasser transportiert werden. Andernfalls wird die Probe nicht angenommen.

Die Probenannahme erfolgt wochentags außer freitags täglich zwischen 08:00 und 12:00 Uhr. Die Patientin bzw. der Patient muss sich mit dem Überweisungsschein der Abteilung, in der die Untersuchung stattfand, an die Abteilung für Grundlagen der Onkologie (Temel Onkoloji Anabilim Dalı) wenden.

Das Untersuchungsergebnis kann ab 14:00 Uhr des Folgetages über das Krankenhaussystem vom Sekretariat der Abteilung, in der die Untersuchung stattfand, oder vom Sekretariat der Abteilung für Grundlagen der Onkologie abgeholt werden.

Gewebetypisierungslabor

Gewebetypisierungstest

Der Gewebetypisierungstest wird durchgeführt, um vor einer Knochenmarktransplantation die Gewebeverträglichkeit zwischen Patientin bzw. Patient (Empfänger) und Spender (Donor) zu prüfen. Mit diesem Test wird der Typ der als HLA bezeichneten humanen Leukozytenantigene bestimmt. HLA-Antigene befinden sich beim Menschen auf der Oberfläche nahezu aller Zellen. Sie präsentieren in den Körper eingedrungene fremde Antigene und stimulieren das Immunsystem. Es gibt sehr viele Typen von HLA-Antigenen; jeder Mensch besitzt jedoch eine bestimmte Anzahl und Art von HLA-Antigenen. Ein Teil davon stammt von der Mutter, der andere vom Vater (genetische Vererbung) und wird als „Gewebetyp“ oder „HLA-Typ“ bezeichnet. Wird Gewebe von einer Person mit abweichendem HLA-Typ auf eine andere übertragen, kann der HLA-Typ des Spenders von der Patientin bzw. dem Patienten als „fremd“ erkannt werden. In einem solchen Fall wird das Immunsystem der Patientin bzw. des Patienten (Empfänger) aktiviert, um das übertragene Gewebe zu zerstören, und es kommt zur „Gewebeabstoßung“. Der Gewebetypisierungstest wird durchgeführt, um den am besten passenden Spender (Donor) mit Gewebeverträglichkeit zu finden und die Gewebeabstoßung zu verringern.

Für wen wird er durchgeführt:
In unserem Labor wird der Gewebetypisierungstest vor Knochenmarktransplantationen zwischen Verwandten durchgeführt. Vorrangig werden Geschwister, Mutter, Vater und Kinder der Patientin bzw. des Patienten untersucht. Wird kein geeigneter Spender gefunden, können auch Verwandte 3. und 4. Grades untersucht werden.

Wie wird der Test durchgeführt:
Die behandelnde Ärztin bzw. der behandelnde Arzt fordert für die Patientin bzw. den Patienten und deren Spender den „Gewebetypisierungstest“ an. Die Person, für die der Test angefordert wurde, geht zur Blutentnahmestelle und gibt eine Blutprobe ab. Mit den Blutproben wendet man sich an die Probenannahme des Gewebetypisierungslabors der Onkologieklinik. Im Labor werden nach der Identitätskontrolle die Blutproben entgegengenommen. Für die Patientin bzw. den Patienten wird eine Akte angelegt und das Patientenaufnahmeformular ausgefüllt. Verwandtschaftsgrade und Besonderheiten werden erfasst.

Der Gewebetypisierungstest wird mit molekulargenetischen Methoden durchgeführt. Zuerst wird aus der Blutprobe DNA isoliert. Mit der gewonnenen DNA werden Tests mit kommerziellen Kits durchgeführt, die die Methoden PCR-SSP und PCR-SSO umfassen. Die Testergebnisse werden analysiert und der Bericht wird gemäß der HLA-molekulargenetischen Terminologie erstellt. Der Bericht enthält die Typisierungsergebnisse der Loci HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DQ und HLA-DR.

Wichtige Hinweise zur HLA-Typisierung
Für den Gewebetypisierungstest wird eine Blutprobe aus dem Arm der antragstellenden Person verwendet. Die Blutprobe muss in zwei EDTA-Röhrchen (mit violettem Deckel) entnommen werden.

Wurde in den letzten 15 Tagen eine Bluttransfusion durchgeführt oder besteht eine Schwangerschaft, muss dies unbedingt dem Laborpersonal mitgeteilt werden. Die Probe wird abgelehnt, wenn die Etikettenangaben nicht korrekt erfasst oder verwischt sind, die Proben geronnen sind, das Probenröhrchen undicht, gebrochen oder gesprungen ist, die Proben nicht in das richtige Röhrchen entnommen wurden oder Angaben zur Patientin bzw. zum Patienten oder zum Spender fehlen (Diagnose, Name der anfordernden Ärztin bzw. des anfordernden Arztes, Adresse usw.).

Die Ergebnisse des Gewebetypisierungstests werden berichtet und innerhalb von 20 Tagen mitgeteilt. Die Berichte werden der behandelnden Ärztin bzw. dem behandelnden Arzt im verschlossenen Umschlag zugesandt und nicht an die Patientin bzw. den Patienten oder deren Angehörige ausgehändigt.

Da die Berichte genetische Informationen der Person enthalten, werden sie nicht in das Krankenhausinformationssystem hochgeladen. Sie werden auf dem Laborrechner passwortgeschützt aufbewahrt, und außer dem befugten Laborpersonal hat niemand Zugriff.

Zytogenetik- und FISH-Labor

Konventionelle Zytogenetik und FISH-Test

Mit den Methoden der konventionellen Zytogenetik und der Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) werden die als Chromosomen bezeichneten Strukturen, in denen die genetische Information jeder Zelle verpackt und gespeichert ist, strukturell und numerisch untersucht (Karyotypisierung). Durch die Karyotypisierung werden chromosomale Veränderungen festgestellt, die vor allem bei hämatologischen Krebserkrankungen für Diagnose und Verlaufskontrolle entscheidend sind.

Wie wird der Test durchgeführt:
Knochenmarkproben werden 24 Stunden lang unter sterilen Bedingungen in einem Kulturmedium vermehrt, das ein gleichzeitiges Wachstum der Zellen ermöglicht (synchronisierte Kultur). Anschließend werden die gewonnenen Zellen auf einen Objektträger gebracht, und die zu untersuchenden Chromosomen werden in einem geeigneten Medium gealtert. Die gespreizten Chromosomen werden gefärbt (Giemsa-Trypsin-Bänderungsmethode) und für die mikroskopische Untersuchung vorbereitet. Die so vorbereiteten Proben werden im Bildanalysesystem strukturell und numerisch untersucht und karyotypisiert.

Bei der FISH-Methode wird ähnlich wie beim zytogenetischen Test mit Knochenmarkproben eine synchronisierte Kultur angelegt. Anschließend werden die Zellen geerntet, und es werden fluoreszenzmarkierte DNA-Fragmente (Sonden) aufgebracht, die den zu untersuchenden DNA-Bereich erkennen. Man wartet, bis sich die Sonden an die DNA gebunden haben, und entfernt nicht gebundene Fragmente durch Waschen. Die Zellkerne werden zusätzlich gefärbt (DAPI-Färbung) und im Bildanalysesystem untersucht. Zytogenetik- und FISH-Ergebnisse werden gemäß der aktuellen „Internationalen Nomenklatur der Humanzytogenetik“ berichtet.

Wichtige Hinweise zur Zytogenetik- und FISH-Analyse
Der Zytogenetik- und FISH-Test wird aus Knochenmarkproben durchgeführt. Unter sterilen Bedingungen in eine heparinisierte Spritze oder ein heparinisiertes Röhrchen (mit grünem Deckel) entnommene Proben müssen so schnell wie möglich nach der Entnahme in das Labor der Abteilung für Grundlagen der Onkologie gebracht werden, um den Verlust lebender Zellen zu minimieren. Außerdem ist es für den Erfolg des Tests wichtig, dass die entnommenen Knochenmarkproben keine Gerinnsel enthalten. Daher wird empfohlen, die Spritze nach der Entnahme ein- bis zweimal auf den Kopf zu drehen, damit sich die Probe gut mit dem Heparin vermischt. Andernfalls wird die Probe nicht angenommen.

Die Berichte zur konventionellen Zytogenetik sind innerhalb von 2 bis 3 Wochen, die FISH-Berichte innerhalb von 10 Tagen über das Krankenhaussystem beim Sekretariat der Abteilung, in der die Untersuchung stattfand, oder beim Sekretariat der Abteilung für Grundlagen der Onkologie erhältlich.

Die Patienten nehmen auf Anforderung und Überweisung der Abteilungen, in denen sie untersucht wurden, die von der Abteilung für Grundlagenonkologie erbrachten routinemäßigen diagnostischen Leistungen in Anspruch. Die Blutproben müssen mit einem geeigneten Überweisungsschein an das Abteilungssekretariat (für Gewebetypisierungsanalysen an das Sekretariat des Gewebetypisierungslabors – der Apherese-Einheit) geliefert werden.

Das Abteilungssekretariat, die Büros der Hochschullehrer und die Labore der Grundlagenonkologie (Durchflusszytometrie-Labor, Immunologie-Labor, Zytogenetik- und FISH-Labor) befinden sich in der 1. Etage der Onkologieklinik der Universität Hacettepe. Das Gewebetypisierungslabor, das Kryobiologie-Labor und die Einheit für zytogenetische Analyse befinden sich im Erdgeschoss der Onkologieklinik innerhalb der Apherese-Einheit.

Telefon:

+90 (312) 305 43 22, +90 (312) 305 43 23 (Abteilungssekretariat)

+90 (312) 305 44 18, +90 (312) 305 43 25 (Routinediagnostik-Labor)

+90 (312) 305 44 11 (Durchflusszytometrie-Labor)

+90 (312) 305 23 70, +90 (312) 305 23 72, +90 (312) 305 23 73 (Gewebetypisierungslabor)

+90 (312) 305 44 12 (Einheit für zytogenetische und FISH-Analyse)

+90 (312) 305 44 08 (Krebsinstitut, Abteilung für Grundlagenonkologie)